Plne automatický stroj na extrakciu a detekciu nukleových kyselín od spoločnosti New Tech

Päť síl:
● Prístroj nakonfigurovaný s krokom extrakcie a purifikácie nukleovej kyseliny
● Prístroj nakonfigurovaný s ultrazvukovým extrakčným modulom
● Prístroj je konfigurovaný s plnou automatikou
● Prístroj nakonfigurovaný s premenlivým zosilnením teploty
● Prístroj je nakonfigurovaný s plne uzavretou reagenčnou súpravou

1. Je potrebné extrahovať a purifikovať činidlá na detekciu nukleových kyselín?
Princíp detekcie nukleových kyselín je nasledovný: pod pôsobením priméru sa DNA polymeráza použije na uskutočnenie amplifikácie reťazovej reakcie na templátovej DNA/RNA (vyžaduje reverznú transkripciu NA) a potom sa deteguje množstvo uvoľneného fluorescenčného signálu na stanovenie či vzorka obsahuje nukleovú kyselinu (DNA/RNA) patogénu, ktorý sa má detegovať.

1) Vzorky, ktoré neboli extrahované alebo purifikované, môžu obsahovať veľa zložiek, ktoré ovplyvňujú konečný výsledok: nukleázu (ktorá môže rozpustiť cieľovú nukleovú kyselinu a spôsobiť falošne negatívny výsledok), proteázu (ktorá môže redukovať DNA polymerázu a spôsobiť falošne negatívny výsledok), ťažký kov soľ (čo vedie k inaktivácii syntázy a spôsobuje falošne pozitívne), príliš kyslé alebo príliš zásadité PH (čo môže spôsobiť zlyhanie reakcie), neúplná RNA (vedúca k falošne negatívnemu zlyhaniu reverznej transkripcie).

2) Niektoré vzorky sa ťažko priamo amplifikujú: Gram-pozitívne a niektoré parazity, kvôli ich hrubým bunkovým stenám a iným štruktúram, ak neprejdú procesom extrakcie a purifikácie nukleových kyselín, súprava bez extrakcie môže zlyhať. vzorky.

Preto sa odporúča vybrať testovaciu súpravu alebo prístroj nakonfigurovaný na krok extrakcie nukleovej kyseliny.

2. Chemická extrakcia alebo fyzikálna ultrazvuková fragmentačná extrakcia?
Vo všeobecnosti možno chemickú extrakciu použiť na väčšinu predbežnej úpravy a čistenia.Pri hrubostenných grampozitívnych baktériách a niektorých parazitoch je však tiež prípad, že chemickou extrakciou nie je možné získať účinné templáty nukleových kyselín, čo vedie k falošne negatívnej detekcii.Navyše, chemická extrakcia často používa silné činidlá, ak elúcia nie je dôkladná, je ľahké zaviesť silnú zásadu do reakčného systému, čo vedie k nepresným výsledkom.

Ultrazvuková fragmentácia využíva fyzické drvenie, ktoré úspešne využíva GeneXpert, popredná spoločnosť v oblasti POCT na humánne použitie, a má absolútnu výhodu pri extrakcii nukleových kyselín niektorých komplexných vzoriek (ako je Mycobacterium tuberculosis).

Preto sa odporúča vybrať testovaciu súpravu alebo prístroj nakonfigurovaný s krokom extrakcie nukleovej kyseliny.a optimálne je, ak je tam ultrazvukový extrakčný modul.

3. Manuálne, poloautomatické a plne automatické?
Ide o problém ceny práce a efektivity práce.V súčasnosti sú nemocnice pre domáce zvieratá bez dostatočného personálu a extrakcia a detekcia nukleových kyselín je práca, ktorá si vyžaduje určité zručnosti a skúsenosti.Niet pochýb o tom, že plne automatický stroj na extrakciu a detekciu nukleových kyselín je perfektnou voľbou.

4. Zosilnenie konštantnej teploty alebo zosilnenie premenlivej teploty?
Amplifikačná reakcia je spojenie na detekciu nukleovej kyseliny a profesionálna technológia zapojená do tohto spojenia je zložitá.Zhruba povedané, enzýmy sa používajú na amplifikáciu nukleovej kyseliny.V procese amplifikácie sa deteguje zosilnený fluorescenčný signál alebo vložený fluorescenčný signál.Všeobecne povedané, čím skôr sa objaví fluorescenčný signál, tým väčší je obsah cieľového génu vo vzorke.

Amplifikácia pri konštantnej teplote je amplifikácia nukleovej kyseliny pri fixnej ​​teplote, zatiaľ čo amplifikácia s premenlivou teplotou je cyklická amplifikácia presne podľa denaturácie-žíhania-predlžovania.Uskutočnil sa čas amplifikácie pri konštantnej teplote, zatiaľ čo čas amplifikácie premennej teploty je výrazne ovplyvnený rýchlosťou zvyšovania a poklesu teploty prístroja (v súčasnosti je veľa výrobcov schopných urobiť 40 cyklov amplifikácie za približne 30 minút).

Ak sú laboratórne podmienky dobré a zónovanie je prísne, je rozumné povedať, že rozdiel v presnosti medzi nimi nebude veľký.Amplifikácia s premenlivou teplotou však syntetizuje viac produktov nukleových kyselín v relatívne kratšom čase.Pre laboratóriá bez prísneho zónovania a profesionálneho školiaceho personálu bude riziko úniku nukleokyselinového aerosólu väčšie, falošne pozitívny výsledok nastane, keď dôjde k úniku a čo je mimoriadne ťažké odstrániť.

Navyše, amplikácia pri konštantnej teplote je tiež náchylnejšia na nešpecifickú amplifikáciu, keď je vzorka komplexná (relatívna reakčná teplota je nižšia a čím vyššia je teplota predlžovania, tým lepšia je špecificita väzby priméru).

Pokiaľ ide o súčasnú technológiu, spoľahlivejšie je variabilné zosilnenie teploty.

5. Ako sa vyhnúť riziku úniku produktov amplifikácie nukleových kyselín?
V súčasnosti mnohí výrobcovia vyberajú ako skúmavku na reakciu nukleovej kyseliny žľazový typ PCR skúmavky, ktorá je utesnená trením a teplotná denaturácia pri variabilnej teplotnej denaturácii pri variabilnej teplote PCR amplifikácie dosahuje 90 stupňov.
Celzia .Opakovaný proces expanzie teplom a kontrakcie chladom je veľkou výzvou pre utesnenie PCR skúmavky a PCR skúmavka žľazového typu pomerne ľahko spôsobí únik.

Je lepšie použiť reakciu s úplne utesnenou súpravou/skúmavkou, aby sa zabránilo úniku reakčného produktu.Bolo by perfektné, keby sa dala vypracovať plne uzavretá súprava na extrakciu a detekciu nukleových kyselín.

Takže nový plne automatický stroj na extrakciu a detekciu nukleových kyselín od New Tech má vyššie uvedených päť optimálnych možností.